1)提取、純化、捕獲
(1)樣本種類:
A:人源:血漿、血清、尿液、胸水;
B:鼠源、兔源:血漿、血清;
C:細(xì)胞來源:細(xì)胞培養(yǎng)上清、細(xì)胞;

(2)方法:
①超速離心法:本公司配備Thermo Scientific? Sorvall? MX Plus 系列落地式微量超高速離心機(jī),高效分離EVs和外泌體。
②免疫分離法:特制生物芯片包被EV普適性抗體(如CD9、CD63、CD81等)或腫瘤特異性抗體(如PDL-1等),精準(zhǔn)分離、純化、捕獲EVs和外泌體。
③PEG沉淀提取富集法:采用Thermo Scientific等公司的PEG沉淀試劑盒,結(jié)合本公司特有的納米生物芯片富集技術(shù),高通量、高速提取EVs和外泌體。
④脂質(zhì)體納米顆粒捕獲法:采用本公司生產(chǎn)的陽離子脂質(zhì)體納米顆粒,高效原位捕獲帶負(fù)電的EVs和外泌體。
⑤濃縮超濾法:采用Merk等公司的濃縮柱,結(jié)合本公司特有的納米生物芯片富集技術(shù),高效分離、純化EVs和外泌體。
2)表征
本公司主要采用電鏡、DLS (動(dòng)態(tài)光散射)和NTA (納米粒子示蹤分析)方法對(duì)EVs和外泌體形態(tài)、粒徑、電位、數(shù)量等進(jìn)行表征。
電鏡圖 粒徑電位圖(血漿標(biāo)本)
電鏡圖 粒徑電位圖(細(xì)胞上清標(biāo)本)

Zhou J, Wu Z, Hu J, Yang D, Chen X, Wang Q, Liu J, Dou M, Peng W, Wu Y, Wang W, Xie C, Wang M, Song Y, Zeng H, Bai C. Sci Adv. 2020 Nov 20;6(47):eabc1204.

3)生物標(biāo)志物檢測(cè)
(1)RNA:包括miRNA、mRNA、circRNA、lncRNA等RNA靶標(biāo),包括探針的設(shè)計(jì)、合成、包被、性能驗(yàn)證、檢測(cè)、數(shù)據(jù)分析等。
(2)膜蛋白:包括EVs和外泌體膜上各種蛋白靶標(biāo),含各類直標(biāo)/非直標(biāo)熒光抗體的篩選、包被、性能驗(yàn)證、檢測(cè)、數(shù)據(jù)分析等。

RNA檢測(cè)

Zhou J, Kwak KJ, Wu Z, Yang D, Li J, Chang M, Song Y, Zeng H, Lee LJ, Hu J, Bai C. Cell Physiol Biochem. 2018;47(5):1909-1924.

 

CD63和PD-L1兩種膜蛋白的EV亞群鑒定
Double immunofluorescence staining of CD63 and PD-L1 membrane protein.

Zhou J, Wu Z, Hu J, Yang D, Chen X, Wang Q, Liu J, Dou M, Peng W, Wu Y, Wang W, Xie C, Wang M, Song Y, Zeng H, Bai C. Sci Adv. 2020 Nov 20;6(47):eabc1204.

1. 細(xì)胞轉(zhuǎn)染(圖A和圖B) 2. Confocal高清成像(圖A)3. TIRF高清成像(圖B)
A Confocal
B TIRF
前列腺癌細(xì)胞株LNCaP免疫熒光染色

Double immunofluorescence staining for target protein of LNCaP cells

A Confocal
B TIRF
肺癌細(xì)胞株A549膜蛋白雙免疫熒光染色

Double immunofluorescence staining for membrane protein of A549 cells

Zhou J, Wu Z, Hu J, Yang D, Chen X, Wang Q, Liu J, Dou M, Peng W, Wu Y, Wang W, Xie C, Wang M, Song Y, Zeng H, Bai C. Sci Adv. 2020 Nov 20;6(47):eabc1204.

本公司配備NIKON全內(nèi)反射熒光顯微鏡(Total Internal Reflection Fluorescence Microscope,簡稱TIRF),高清成像,并擁有多項(xiàng)AI數(shù)據(jù)分析軟件著作權(quán)專利。
可根據(jù)客戶需求設(shè)計(jì)并合成特異性靶向目的基因的分子信標(biāo)(含miRNA、mRNA、circRNA、lncRNA)

可根據(jù)客戶需求包被需求設(shè)計(jì)并合成各類脂質(zhì)體納米顆粒,用于轉(zhuǎn)染細(xì)胞、DNA、RNA,包被DNA、RNA、疫苗、抗體及藥物遞送等